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如何选择新鲜及冷冻PBMC?

我们在第一篇推文《How Fresh are you PBMC》中提到当全血或Leukopak离体一段时间后再提取PBMC,会对PBMC活性及功能均产生较大影响,在此情况下与其使用所谓的“新鲜”PBMC不如直接使用当即分离得到的冷冻产品。

但新鲜PBMC相对于冷冻PBMC而言,确实有其优势:

1. 细胞冷冻复苏难免会对其活性造成影响,死亡的细胞及碎片可以靠离心去除,但复苏后状态较差的细胞会影响自身及周边细胞的功能,因而对实验造成干扰。

2. 由于PBMC中含有一些含量非常低的细胞(如CD34+),冷冻复苏会对这类本身含量就很稀缺的细胞造成较大影响;

现阶段由于国内众所周知的原因,样本来源困难且供应商对来源渠道均讳莫如深,这就容易导致以下问题:

1.   PBMC质量及服务的良莠不齐。样本源头就很难保证,何谈确保PBMC的质量稳定性

2. 同时供应时间不稳定,往往实验需要根据供应商的时间来确定,加班加点是常事,

3. 更加严重的是由于血液本身为敏感传染源,基于来源的不透明不稳定,很难确保病毒检测的百分百可靠性,这也给实际操作人员带来巨大的实验风险;

4.   私自采集血液为违法行为;

若确实需要用到新鲜PBMC,如前期摸索或建立方法学时,此时对PBMC用量要求较小,可通过公司内部捐献进行解决,后续转成冷冻产品。

从现阶段我司接触的情况来看,对绝大部分实验,使用冷冻PBMC完全可行的方案,且冷冻PBMC优势较为明显:

1. 国外原装进口的冷冻产品均有伦理及知情,免除后顾之忧;

2. 每个donor均进行完善的病毒检测,真正做到了用的放心;

3. 细胞复苏活性可以保证,一般复苏活性>90%

4. 可根据实验需要挑选特殊个体(年龄,性别,HLA-typingCMV情况等);

5. 减少个体差异,保证实验的连续稳定,单一donor一次捐献可以提取40-50100million产品,且可间隔30天重复抽取;

6. 冷冻细胞液氮保存即可,随用随取,可任意安排实验时间;

7. 提供磁珠分选好的亚型细胞,特别是对于Treg这类含量很少的细胞,由于国外能够得到的 PBMC量巨大,因而可以得到的单个个体来源的稀缺细胞数量亦较大;





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