Schbio Biotech

PBMC细胞复苏活性及计数

试剂:

1. 3% Acetic Acid with Methylene

2. 红细胞裂解液

3. Trypan Blue Solution 台盼蓝

仪器

1. 枪头

2. 细胞计数板

3. 2ml 离心管

4. 96 孔板

5. 细胞计数显微镜

6. 计数器

方法一:步骤(需用红细胞裂解液裂解)

1. 10 μl Trypan Blue Solution 放入 96 孔板中,待用。

2. 25 μl 细胞悬液,加入含 475μl 红细胞裂解液的 2ml 离心管中。

3. 颠倒混匀,放置 3 分钟后, 10 μl 10 μl Trypan BlueSolution 混匀。

4. 10 μl ,加入细胞计数板,静置 2 分钟。

5. 在显微镜下计数细胞,计数细胞计数板中 4 大格中的细胞,染上蓝色的为死细胞。

6. 计算细胞数量和细胞活性

细胞数计算公式:

细胞数量 = N/4×D×_ml = _×104

N = 细胞计数板中 4 大格中的活细胞

D = 稀释倍数

细胞活性 = 活细胞/全部的细胞(活细胞+死细胞)

7. 记录细胞数量和细胞活性


方法二:步骤(需用 3% Acetic Acid with Methylene

1. 25 μl 细胞悬液,加入含 475μl 3% Acetic Acid with Methylene 2ml 离心管中。

2. 颠倒混匀,放置 3 分钟后,取 10 μl ,加入细胞计数板,静置 2 分钟。

3. 在显微镜下计数细胞,计数细胞计数板中 4 大格中的细胞。

4. 计算细胞数量。

细胞数量 = N/4×D×_ml = _×104

N = 细胞计数板中 4 大格中的活细胞

D = 稀释倍数

5. 记录细胞数量

备注

1. 红细胞裂解液裂解和 3% Acetic Acid with Methylene 的区别:

使用 3% Acetic Acid with Methylene 时,只能计算细胞的数量,但是无法区分其中的死细胞;最后只能获得细胞数量。

而使用红细胞裂解液裂解能区分细胞中的死细胞,同时也能计算细胞的数量;

最后可以同时获得细胞数量和细胞活性。

2. 最佳的细胞浓度是在计数板的每个大格里有 50-100 个细胞(总数 200-400)。如果不是,要做适当的浓度稀释后,再计数。


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