Schbio Biotech

PBMC细胞复苏protocol

文章附图

StemExpress细胞冷冻液中含DMSO10%),用程控降温方式进行冷冻。请使用以下方法对细胞进行复苏以最大程度保证细胞活性。


材料

冷冻细胞

RPMI+10%FBS或加热至37度的培养基

bufferPBS0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2 mm EDTA

50ml无菌离心管

70%乙醇


设备

水浴加热到37C

离心机

5毫升吸管

移液管和移液管头


步骤

1.    将含10% FBSRPMI放入37℃水浴中;

2.    将冻存管置于37度水浴中约1.5min,并不断旋转,但不要淹没整个冻存管;

注意:从液氮罐中取出冻存管后应立即执行此步骤

3.    当小冰晶仍有残留时取出冷冻瓶;

注意:在水浴中过长时间会损坏细胞和增加细胞死亡

4.    放入生物安全柜中,用70%乙醇擦拭冻存管外部;

5.    使用5毫升移液管将冻存管中的内容物转移到50 ml锥形管中;

6.    1ml含有10%FBS的热RPMI冲洗冷冻小瓶,然后转移到50 ml锥形管;

注意:冲洗冻存管有助于回收粘附在管壁的细胞;

7.    为了去除细胞冷冻的DMSO,添加15毫升含有10%FBS的热RPMI,并离心6分钟—804 rcfaccel 9, brake 9);

8.    去除上清液,轻轻地将细胞重新悬浮在2毫升热缓冲液中;

注意:不要使用涡流混合器之类的重新悬浮细胞,这将破坏细胞,降低活性

9.    随后进行细胞计数

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