人单核细胞分化巨噬细胞/树突状细胞

人单核细胞可培养成巨噬细胞或树突状细胞。培养条件可影响细胞功能和表型。这个protocol就是一个典型案例。

材料

单核细胞

培养基：IMDM+5～10%的人血清，重组巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）浓度为10 ng/ml。

培养瓶或培养皿

不含Ca2+或Mg2+的PBS

步骤

1.    按照标准程序解冻并计数细胞；

2.    将细胞浓度调整为0.5million/ml。此浓度可根据您的实际情况进行调整；

3.    在37°C，5%的二氧化碳条件下培养；细胞密度为1–2.5 x 105/ c㎡；

4.    细胞可以立即使用或培养5天后用于实验；

5.    如果要长时间保存细胞，应每3-4天更换一次培养基，去除一半的培养基，换成等量的新鲜培养基。

6.    细胞收集

a)      收集培养基并装入试管中。立即将PBS添加到贴壁细胞中，上下移动移液管冲洗培养皿表面并收集入试管最红；

b)     向培养皿中加入PBS，并将培养皿置于37°C的培养箱中10-15分钟。在此期间，细胞应开始从培养皿表面脱离。当用相差显微镜观察时，它们变得更圆、更亮。

c)      将PBS中的细胞与a中的细胞混合；

注意点:

1.    在血清或巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）下培养5天的单核细胞会分化成巨噬细胞。在科学文献中，单核细胞源性巨噬细胞的描述通常是指用这种方式培养的细胞。

2.　单核细胞作为粘附细胞和非粘附细胞的混合物生长，粘附细胞的比例取决于培养基和刺激物。这使得将它们从一个培养皿移到下一个培养皿或进行收集过程变得复杂化。细胞的得率通常低于起始细胞数。在培养中需要考虑此因素。

3.500 U/ml GM-CSF和500 U/ml IL4可以分化成DC细胞